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检索：孔懿
翻译：孔懿
审核编写：李若洁
大家还记得的上周的奇美拉专题大餐吗？
发完就有小伙伴发问，那奇美拉分支杆菌感染怎么诊断呢？实验室有检测方法吗？不要着急，马上满足你们的好奇心！
欧洲疾病预防与控制中心（ECDC）
针对变温水箱相关的奇美拉分枝杆菌感染的病例诊断、实验室诊断和环境监测指南
病例回顾性调查
病例定义
临床标准（以下）：
人工瓣膜心内膜炎（Prosthetic valve endocarditisi）
人工血管移植物感染（Prosthetic vascular graft infection）
胸骨切开伤口感染（Stemotomy wound infection）
纵隔炎（Mediastinitis）
全身感染扩散，包括栓塞和免疫激活，如脾肿大，关节炎，骨髓炎，血细胞减少的骨髓感染，脉络膜视网膜炎，肺部感染，肝炎，肾炎，心肌炎。
暴露标准：
患者的感染症状开始之前的五年内曾接受过需要体外循环的外科手术。
确诊病例
患者有以上临床症状和暴露史
并且
在侵入性样本（血液，脓液，组织活检或植入的假体材料）中培养出奇美拉分枝杆菌或检测到奇美拉分枝杆菌的DNA序列。
疑似病例
患者有以上临床症状和暴露史
并且
在侵入性样本（血液，脓液，组织活检或植入的假体材料）中直接PCR和DNA序列扩增发现奇美拉分枝杆菌。
或者
在侵入性样本（血液，脓液，组织活检或植入的假体材料）中培养出或直接PCR检测出鸟分枝杆菌从属（Mycobacterium aviumcomplex, MAC）。
或者
在紧邻假体材料心脏或血管组织中或胸骨切开处的伤口标本中，组织病理学检测到非病理性肉芽肿和泡沫／肿胀的巨噬细胞同时携带大量耐酸杆菌。
环境检测方法
样本
✄ 采集通风设备的水槽中的水，患者保温毯中的水，以及用于体外循环的变温水箱的水各1L。
✄采集心胸外科手术中的无菌医疗用水（50ml）：阀门保护液、心脏停搏液，皮肤消毒液、肝素，以及其他医疗液体。
✄ 如果在手术室内有出水口，采集来自供水系统的出水口处1L。样本应在第一天手术时采样。采样的具体时间应被记录。
✄在使用体外循环的心血管外科手术中同时变温水箱工作时候，手术室内采集250-500L的空气样本。采样位置推荐选择在变温水箱的前面和后面各0.3m处。
培养方法
以上所涉及的环境水样本、气溶胶和液体标本应在分枝杆菌实验的2级生物安全柜中操作。非结核分枝杆菌并不属于3级生物安全的致病菌，但仍需要在分枝杆菌实验室做进一步的培养和鉴定。
对水标本进行过滤、离心的浓缩。过滤方法比离心检测奇美拉更敏感。
简单来说，环境样本的处理可以遵循Annex的通用方法。如果可能，首先使用西吡氯铵（0.005%）而非广泛使用的N-乙酰基-L-半胱氨酸氢氧化钠（NALC-NaOH）或NaOH对标本进行处理，从而去除其他污染的环境菌，进一步去除污染帮助MAC的检出请参考[1]。过滤后的水样标本接种在选择性平皿（含有抗生素的）Middlebrook 7H11 或7H10平皿或以鸡蛋为基础的Lowenstein-Jensen 平皿。同时可以进行平行实验，接种在液体培养基，使用离心后的50ml样本，然后接种在MGIT960系统。如果资源有限推荐使用固体培养基。
应在变温水箱消毒前采集水标本。在水标本处理前，加入无菌的硫代硫酸钠来中和掉水中残留的次氯酸盐。但是在处理饮用水时不需要进行中和。
空气标本的处理可以参考文献[2-5]。
气溶胶可以通表面冲击采样器采集空气而获得。需要在给定的时间内采集一定量的空气，使用标准的（含有抗生素的）选择性平皿，Middlebrood 7H11或7H10 。至少需要采集250-500L的空气。
鉴定
固体培养推荐在35度培养8星期。每周观察非结核分枝杆菌（NTM）的生长情况并进行鉴定。可能的情况下，应对分枝杆菌的生长菌落进行计数，报告为CFU/L。
NTM的菌种鉴定应在有资质的分枝杆菌实验室进行或在基于分子学鉴定的实验室进行，分子鉴定应检测两条DNA序列（ITS，16s rRNA, rpoB和hsp65 [6,7]）。一项系统的检测方法采用独特的分枝杆菌探针，INNO-LiPAMycobacteria v2 line probe assay (the MIN-2 probe)进行检测[8,9]。
基因分型
目前有多种对鸟分枝杆菌从属的基因分型方法[3]。但是，并没有标准的奇美拉分枝杆菌分型的方法。使用全基因组测序方法（WGS）进行生物系统发育图比较被认为是最合适的方法。集中式计算机生物信息学分析可以基于在实验室间协议之后，在不同实验室中生成的WGS原始数据共享，以协调Illumina平台上的排序协议。应该通过共享参考菌株的基因组DNA内部控制来进行实验室之间的重复性检查。另外，参与国将被邀请分享一个国家级的菌株库其中包括随机编码的非相关的奇美拉分枝杆菌的菌株用于进行WGS的比较，同时帮助估计整个欧洲的基因组多样性的背景。
1.Radomski N, Cambau E, Moulin L, Haenn S, Moilleron R, Lucas FS. Comparison of culture methodsfor isolation of nontuberculous mycobacteria from surface waters. Appl Environ Microbiol. 2010 Jun;76(11):3514-20.
2.Sax H, Bloemberg G, Hasse B, Sommerstein R, Kohler P, Achermann Y, et al. Prolonged Outbreak of Mycobacterium chimaera Infection After Open-Chest Heart Surgery. Clin Infect Dis. 2015 Jul 1;61(1):67-75.
3.Jagielski T, van Ingen J, Rastogi N, Dziadek J, Mazur PK, Bielecki J. Current methods in the molecular typing of Mycobacterium tuberculosis and other mycobacteria. Biomed Res Int. 2014;2014:645802.
4.Public Health England. Protocol for Environmental Sampling, Processing and Culturing of Water and Air samples for the Isolation of Slow Growing Mycobacteria June 2015. Available from: https://www.gov.uk/government/uploads/system/uploads/attachment_data/file/434197/Air_water_environmental_sampling_SoP.pdf.
5.Zhang Y, Rajagopalan M, Brown BA, Wallace RJ, Jr. Randomly amplified polymorphic DNA PCR for comparison of Mycobacterium abscessus strains from nosocomial outbreaks. J ClinMicrobiol. 1997 Dec;35(12):3132-9.
6.Ben Salah I, Cayrou C, Raoult D, Drancourt M. Mycobacterium marseillense sp. nov., Mycobacterium timonensesp. nov. and Mycobacterium bouchedurhonensesp. nov., members of the Mycobacterium avium complex. Int J SystEvolMicrobiol. 2009 Nov;59(Pt 11):2803-8.
7.Turenne CY, Semret M, Cousins DV, Collins DM, Behr MA. Sequencing of hsp65 distinguishes among subsets of the Mycobacterium aviumcomplex. J ClinMicrobiol. 2006 Feb;44(2):433-40.
8.Tortoli E, Mariottini A, Mazzarelli G. Evaluation of INNO-LiPA MYCOBACTERIA v2: improved reverse hybridization multiple DNA probe assay for mycobacterial identification. J ClinMicrobiol. 2003 Sep;41(9):4418-20.
9.European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC). Mastering the basics of TB control: Development of a handbook on TB diagnostic methods. 2011.
原文：EU protocol for case detection, laboratory diagnosis and environmental testing of Mycobacterium chimaera infections potentially associated with heater-cooler units:case definition and environmental testing methodology. August 2015. ECDC .
图文编辑：刘欢
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发表于 2017-10-30 19:00:00