《医学诊断实验室工作安全指南2012》学习参考【附译文】

胡杨

缩略词汇总：
PPE：个人防护装备   BSC：生物安全柜   UV：紫外线  
POC：点护理   SOP：标准操作规程   LAIS：实验室相关感染
BSL：生物安全水平   ACH：每小时换气次数   HEPA：高效空气过滤器
PAPR：电动送风过滤式呼吸器

背景资料
     随着诊断技术的不断进步，实验室规模与技术类别越来越宽泛。从管理的角度预防职业伤害和职业感染更加引起高度关注。监测不良事件和非惩罚性报告已经迫切需要成为日常必需活动。美国报道实验室人员的职业感染(LAIS)高发于普通人群。例如乙肝暴露4/1000的比例，为普通人群2-4倍。 肺结核为3-9倍。英国实验室感染率为18/10000。感染源细菌、病毒、真菌孢子、寄生虫均有，其中细菌占40%。不当操作产生气溶胶或受污染手套也会导致LAIS。其他职业伤害常见的有针刺伤，酸碱泄漏，玻璃飞溅眼伤害和。即使非病原体相关临床检测操作，由于容易忽视生物安全意识和不正确使用PPE，也会导致LAIS发生。这种问题更常发生在新技术引入和临床POC（点护理，Point of Care）诊断操作期间。
    制定符合实际的医院生物安全准则，落实规范化操作规程，是解决实验室安全的必由之路。专家公认在临床诊断实验室工作属于有多种风险职业。诊断实验室是一个非常具有挑战性的工作环境。但如果大家熟悉并遵守安全防范措施，风险就会很低。安全目标是降低至零风险，只要努力并不是高不可攀。
　　　实验室暴露需要建立监测系统，不记名报告收集相关信息，为分析评价与培训干预提供依据。实验室感染的五个最主要的途径是：污染利器损伤；皮肤粘膜溅污；口鼻接触沾污；动物咬抓伤；吸入感染性气溶胶。前4个约占20%，但不可否认的是，不明原因LAIS能够占到一半以上。数据表明，无法预料的传染性气溶胶在LAIS中不容忽视。
　　　临床诊断实验室与医学研究实验室在风险度上具有明显差异。建立实验室“安全文化”，是临检部门负责人必须履行的职责。鼓励各实验室责任人识别相关风险，规范工作流程及严格执行SOP，为降低风险开展系统风险评估活动。建立实验室安全文化，在完善基础设施的同时，必须接受管理部门督导，促进员工安全行为。临检实验室负责人必须履行的安全责任有：
1、制订安全制度，组织建立并实施临检实验室安全文化；
2、梳理实验室安全隐患，制定SOP及杜绝措施;
3、开展风险评估，确保所有人员能够识别隐患；
4、开展培训教育，确保所有人员掌握防控技术方法；
5、培训识别隐患方法，并制定降低风险的管理策略；
6、对临检人员和临床医护人员进行标本采集和转运、接收安全教育。

胡杨

胡杨 发表于 2014-6-10 16:20
缩略词汇总：
PPE：个人防护装备   BSC：生物安全柜   UV：紫外线  
POC：点护理   SOP：标准操作规程    ...

一、临检实验室设计与建筑布局规划
　　实验室规范设计是保障安全的前提。工作区设计不当后期改造非常困难，甚至是不可能的。因此设计必须考虑安全问题审慎规划。
　　虽然国家对实验室面积没有做强制性规定，但提供一个安全的工作区域，实验室30平米/人是一个比较合理的面积。操作区工作椅后面的空间距离障碍物不小于1.5米。
　　实验室独立门禁系统设计，内气流由洁到污。普通BSL- 2级微生物实验室门关设计，必须能够限制非工作人员进入。清洗设施，非手触碰式水龙头（感应或脚踏操作）洗手池、医疗废物处置设施，BSL- 2水平生物安全柜，防渗工作台面，冰箱，紧急洗眼站，每个工作站安装集成模块化电话，电脑和电源插座，1厘米翘沿仓储货架，工作区域照明等做为基础设施必须提供。设计不再建议使用明火燃气灶（Gas burners are no longer universally recommended）。
　　　血培养仪，自动培养仪，自动化酶免疫测定，冰箱，自动化革兰氏染色，核酸检测以及足量移液工具等等是必需设施设备。标本处理，报告打印等等工作需要留足摆放与操作的空间。建议规划预留2平米的厌氧室备用。

胡杨

胡杨 发表于 2014-6-10 16:21
一、临检实验室设计与建筑布局规划
　　实验室规范设计是保障安全的前提。工作区设计不当后期改造非常困 ...

二、生物安全风险评估
    风险评估涉及到一个专业判断的主观过程。识别风险，制定措施，减少伤害，是风险评估工作的目的。临检实验室需要符合生物安全水平2级（BSL-2）标准，并根据具体情况实施标准预防，是生物安全遵循的基本原则。阅读相关文献资料可以提供风险评估的进一步帮助。实验室危害的风险贯穿于标本采集到最终处置的整个过程。由于信息数据的不完整性，存在评估偏差是可以理解的。风险评估没有一个标准的或正确的方法，但评估技术策略是基本相似的。风险评估的标准化可大大提高评估质量。风险评估过程一般包括以下五个步骤：
1、风险识别，确定各种实验室相关隐患。如：割伤，针刺，咬伤；粘膜直接接触，以及吸入气雾剂，经口吸入液体等等。
2、梳理识别可能导致暴露的操作活动。如：工作区空间不足，生物安全柜外操作产生气溶胶，离心管破裂，高压灭菌器维护不当，锐器盒装得太满，使用锐器，使用明火，PPE使用不当，一人单独实验室工作。等等。
3、评估实验室人员防范能力和经验。如：年轻体弱，过敏体质，未免疫接种，服药行动反应迟缓，经验不足，培训不佳等等，均会增加风险。同时精神状态，工作压力，团队认知，责任心等问题也与风险相关。
4、确定风险优先级。对于确定的风险活动进行发生可能性和后果严重性进行分析评价。后果依赖于伤害暴露的时间与频率，并与有无疫苗接种和能否治疗等综合因素相关。发生可能性分级（肯定-可能-不确定-不可能-罕见）与后果严重性分级（以LAIS为例：定植-感染-就医-后遗症-死亡），综合评价排序。
5、制定防范措施，实施和评估监控，以减少暴露风险。
　　针对各种风险事件制定干预计划是尽量减少暴露伤害的必要程序。加强防范的首要任务是完善基础设施。生物安全柜，锐器盒，离心机安全杯，防溅板，安全吸液工具等等逐一排查。然后梳理工作区域设计问题，比如：区域划分与工作污染度对应、定向气流或负压，洗手池，门禁，洁污双门进出等等。加强管理和SOP控制是必要手段。环境清洁、通风、手卫生、PPE、气溶胶预防、禁止饮食、限制使用锐器并禁止针头回套、操作飞溅最小化、从洁到污强制流程、职业健康档案，免疫接种，事故报告与急救，暴露处置、应急预案、培训教育等等，加强监管，落实到位。风险评估是一个持续的过程，至少需要根据技术与人员的变更而变化。针对新问题新情况不断完善与更新并进行年度审查。
　　职业安全主要依赖于基础设施与制度落实。常规着装需要实验室工作服，以防止个人外衣暴露污染。使用个人防护装备（PPE）是最后的保护屏障。接触表面污染的任何器具物品，都需要戴手套。如果生物安全柜（BSC）或防溅板都没有，则需要做口面部防护（戴口罩，带护目镜口罩，戴内置眼罩口罩，）。但是面部防护并不能完全代替BSC。在BSL-2以上操作时，必须使用BSC或类似装置预防飞溅或气溶胶。进行风险评估如有必要采用其他呼吸系统保护装置。实验室负责人负责按1-4级确定各类操作所需的BSL与对应的实验室安全工作环境。并负责起草与更新生物安全手册，记录安全手册培训使用情况。

胡杨

胡杨 发表于 2014-6-10 16:24
二、生物安全风险评估
    风险评估涉及到一个专业判断的主观过程。识别风险，制定措施，减少伤害，是风 ...

三、诊断实验室基本安全守则
　　1、标本接收登记点: 标本容器无污染并保持完好，验收符合接收原则。大多数标本可以气动管传输，但无密封盖的标本及SOP确认的不适宜标本除外。标本处理均在生物安全水平 BSL- 2下的BSC内进行，如果BSC无法使用，标本处置必须穿实验室工作服和戴手套，使用防溅板。必须遵循普遍防护原则。标本处理最好配置大空间的能够允许双人操作的BSC。
　　　实验室普通操作区最低个人防护装备是工作服和手套。在微生物室工作建议佩戴外科口罩，如果在BSC内操作可视情况选择（Minimal PPE for the general setup area is gown and gloves. In microbiology, a surgical-type mask is recommended, but optional if the BSC is used. ）。对于结核实验室和病毒实验室，技术人员应佩戴N95口罩并做密合性测试，或选择其他经风险评估确认的适当呼吸系统保护装置。外科口罩提供口面部保护，但不是呼吸道个人防护装备。虽然N95口罩比外科口罩提供更高程度的保护，但BSL- 2生物防护水平下操作，通常并不需要佩戴N95口罩，生物安全柜内操作能够提供全方位全天候保护。分枝杆菌，真菌，病毒和分子标本处理，需要考虑提供针对性的额外保护措施。
　　　2、标本容器泄露：交接的患者标本必须一人一袋，以防误认和交叉污染。标本容器破损或泄露，由于标本可能已被污染故拒收，建议重新采集标本。如果发生暴露，记录事件并通知主管。所有标本在处理环节泄露，则立即戴手套做污染部位处理和消毒。根据标本的采集难易程度和是否被污染，决定是否丢弃重新采集标本还是继续处理，记录并报告。
　　标本容器有外污染，评估所有标本容器是否会有潜在污染。使用毛巾或纱布蘸实验室消毒剂擦拭外污染。确保标签和条码检测前完好。手拿标本管或容器，始终握标本容器，不得拿捏标本塞子或盖子，防止泄漏和破损。确保检测或存储前，盖子紧固。标本处置按SOP进行，确保由洁到污。个人防护用品使用说明，尽可能在SOP手册的相同页码位置记录，并在每个操作地点张贴PPE使用要求。
　　微生物实验室主要有化学和生物两种危险类型。革兰氏染色的结晶紫，亚甲基蓝，碘化钾和乙醇都是刺激物；结晶紫还是致癌物，乙醇是肝毒素。处理活体标本有产生气溶胶，皮肤和环境污染的可能。染色或涂片制备建议戴一次性手套和做眼部防护（安全眼镜或化学护目镜）。标本袋一次性使用按医疗废物处理。设备清洗消毒，检查维修的污染防护方法，与制造商联系。
　　针对飞溅或气溶胶问题，如果BSC、离心安全杯、负压实验室等操作程序控制到位，经风险评估PPE使用可以弱化。在开放性操作台工作，由于工作各不相同，要有针对性的建立SOP程序。每个操作台旁均要安装热水洗手池，提供手消剂方便随时进行手卫生，吸水垫处理意外泄漏。提供安全眼镜，防溅罩，呼吸保护装置，安全手套以备不时之需。普通微生物实验室，不需要在实验室开放区域戴口罩和一次性手套。但可以根据个人意愿使用。如果使用手套，很容易在日常使用过程中被污染，因此手套不得复用或洗涤。离开操作台脱去，需要时换双新的手套。（In the general microbiology laboratory, masks and disposable gloves are not required in the open laboratory but may be voluntarily used. If gloves are used, they can easily become contaminated during routine use；therefore, gloves are not to be washed and reused. Discard gloves, and don a new pair when leaving the workstation.）
    血培养等操作必须使用防溅板。发生飞溅或泄漏必须报告。检测有气味特征的某些细菌，嗅探细菌培养物是实验室不安全行为。CDC明令禁止嗅探细菌培养物。革兰氏阴性球杆菌等需要隔离的细菌应在BSC内操作。【待续】

胡杨

本帖最后由 胡杨 于 2014-6-12 11:55 编辑

    实验室不得使用明火。提倡使用一次性针头。操作台就近配备锐器盒。电脑键盘必须使用易清洗消毒的防护罩，至少每班结束做清洗消毒。尿标本下水道冲排，
粪便、体液、呼吸道标本按医疗废物处理，必要时高压灭菌。BSL-3实验室标本必须高压灭菌后，做医疗废物处理。
    3、个人防护装备（PPE）
　　正如前述，操作程序控制始终是安全防御的第一道防线，PPE仅是最后的附加保护屏障。实验室个人防护装备包括手套，实验室工作服，隔离衣，鞋套，工作鞋，口罩，面罩，防护眼镜和护目镜，用来保护实验室工作人员暴露于物理，化学和生物危害。根据需要给每个员工都配备个人防护装备，有助于个人防护落实。
    PPE一般与生物安全柜和其它设备配合使用。某些情况下在BSC内操作并不现实，个人防护装备，包括飞溅防护板能够提供保护。PPE定义为“能够阻止感染性物质到达人员的衣服，皮肤，眼睛，嘴，或黏膜而使用的物品”。建议穿实验室工作服防止污染个人服装。到非实验室区域(如餐厅、休息室、行政办公室、公共区域)必须脱去。一次性防护服和其他污染物一起处理，复用工作服洗衣房清洗。不要把实验室服装和其他个人防护装备带回家或做其他用途。单位必须提供工作服，并提供复用实验室服装的洗衣服务。
    生物安全柜外打开标本容器和移液，培养等可能发生飞溅或喷溅的操作，必须使用眼睛和面部防护用品（护目镜，口罩，面罩，或其他飞溅保护用品）。无论是眼镜还是隐形眼镜都不是个人防护装备。戴隐形眼镜的实验室工作人员做上述操作必须使用脸部保护。由于镜片能够增加化学物质粘膜接触时间，隐形眼镜对化学飞溅可以增加眼睛伤害。对于需要矫正视力的工作人员，在实验室需要佩戴有护边的安全眼镜。员工必须接受培训，至少应该知道PPE的正确选择使用与局限性，正确的穿脱与处置方法。
    微生物实验室必须配备相应的BSC。生物安全柜的三种类别与使用范围有明确界定。I级BSC仅相当于一个化学通风橱，可以在一般的微生物实验室使用。大多数微生物实验室不处理挥发性化学物和毒素，可使用II级BSC。病毒实验室可能处理如埃博拉病毒和猴痘病毒等高度传染性病原体，需要使用III级BSC。所有BSC必须专业人士正确安装，维护年检。移动BSC必须重新测试。工作前至少开机4分钟，净化内环境。每天用毕消毒剂表面擦拭消毒。紫外线（UV）灯消毒不是必需的。
　　　清洁消毒工作能够保护实验室工作人员，环境与物品。实验室工作台消毒必须做为每个SOP的构成部分，如必须使用什么个人防护装备，如何清洁表面，用什么消毒液，以及如何处理清洁材料，消毒作用时间等。并制作单页就近张贴以供随时参考。工作前与结束后均要做环境表面清洁。
　　　戴手套接触过的任何物品（如计时器，笔，电话，温度计等）都必须清洗消毒。酒精容易挥发而大大降低效果，所以不得使用酒精或含酒精消毒剂做物体表面消毒。（Do not use alcohols or alcohol-based solutions alone to disinfect surface areas.） 建议使用有效氯等环境表面消毒剂。配备有批件适宜消毒剂用于处理重复使用的医疗器械表面。
　　　工作台面，固定架，染色架，水浴箱，托盘，座椅等每班次结束清洁。需要清洁的任何表面即使使用了一次性衬垫也不能例外。座垫必须清洁或每班次一次性使用。一次性聚乙烯薄膜，高防滑吸水衬垫都容易获得，对防止渗水、染色、腐蚀、污染均有帮助，尽可能使用，并在每班结束时丢弃。不得使用利器刮残留在表面干的血液或体液，容易产生气溶胶和锐器伤。
　　　有效氯消毒剂常用于表面消毒。高浓度有效氯有刺激性和腐蚀性。有效氯与其他酸碱性清洁剂混合使用，能够产生氯气，引起恶心，眼睛刺痛，流泪，头痛和呼吸急促等刺激性，暴露于有效氯气味强烈区域的工作人员，应立即避开该场所，开门通风至气味消除再进入。对不锈钢的腐蚀性，可通过稀释使用，消毒后水擦拭去除不锈钢表面残留解决。有效消毒必须使用0.5-2%的次氯酸钠工作液。市售漂白溶液含有5.25 ％次氯酸钠，1:10稀释（含 5000 ppm 也即mg/l的有效氯）会产生0.53％次氯酸钠溶液，每天现配备用。 【To be an effective disinfectant, working bleach solutions must contain >0.5% but

胡杨

胡杨 发表于 2014-6-10 16:27
实验室不得使用明火。提倡使用一次性针头。操作台就近配备锐器盒。电脑键盘必须使用易清洗消毒的防护罩 ...

　　处理干冰必须戴绝缘手套和防护眼镜。使用夹子取干冰块，用勺子舀颗粒状干冰。处理干冰让其在通风良好的地方升华或蒸发到大气中即可，不得在下水道，水池，厕所处置干冰。如果干冰下水管冲排，会冻裂陶瓷或聚氯乙烯（PVC）排水管，遇沼气会引起爆炸。微生物实验室冻结并保存的细胞和病毒标本，病理科冰冻切片，电镜室等常使用液氮。
　　液氮等低温液体是液化的气体，正常沸点极低（-196 ℃）。主要危害有包括冷灼伤和冻结，窒息，爆炸，材料脆化。始终佩戴防护眼镜（或带护目镜的面罩）。眼睛对冷冻极为敏感，液氮或液氮蒸气可引起眼损害。
　　不要让任何未受保护的皮肤接触未绝缘管，软管，钳子，喷淋器，标本盒储物架，或其他金属物体，因为这些接触液态氮的物品温度很低，一旦皮肤粘到下意识躲避会导致皮肤撕裂伤。
　　 电气安全事故可分为触电和火灾两大类。用电设备，插头插座及时维修，水源附近用电设备和洗眼器、淋浴器等用水设备插座接地或使用继电器，线路不得超载。尽可能不使用多插座电源板，必须使用需经过电工确认。维修设备前切断电源，或使用配电箱闭锁装置防止电路被意外接通。电气设备均会产生火花，其附近不得放置易燃或挥发性气体或液体。切勿将易燃易挥发液体放置家用冰箱，由于开门激活灯开关会产生火花点燃冰箱内挥发气体，引起爆炸和火灾。存储有爆炸性、挥发性液体必须使用专业冰箱。
　　压缩气钢瓶有三大安全隐患：笨重圆柱体倾倒导致人身伤害；气阀脆弱易折抛射伤人；阀门故障有毒或易燃气体发生泄漏。凡有压缩气体使用区域，必须保持通风良好，气瓶需使用链条或皮带牢固地墙固定，以防止倾倒。缸体小于50CM可能会放置在操作台面或需要墙壁支架固定，安全性做评估确认。每种类型气体使用不同的接口和管路，日常安全检查监控。
　　杜瓦瓶（贮存与运输液态气体的一种隔热保温金属容器）分装操作时穿紧袖口长袖工作服，戴宽松手套，确保一旦接触冷冻液体能够迅速甩掉。全覆盖鞋能够护足，防液体泄露冻伤，切勿穿凉鞋或通透式皮鞋。切勿将戴手套的手探进液态氮。探查液氮罐内标本，使用特殊的低温持物钳。液氮中不要插入中空管，因为液氮有飞溅的危险，液氮气化可以从管腔中喷出。
　　虽然氮气惰性无毒，但它可以通过替换空气中的氧气至低于维持生命所需的水平而窒息。氮过量吸入可引起头晕，恶心，呕吐，意识丧失和毫无预兆死亡。液体冷冻剂在室温下排出到大气中，以700-800倍的液体量蒸发并迅速膨胀。即使是少量的液体，即可替换大量的氧气，减少空气中安全水平的氧含量。因此，不得在密闭空间储存杜瓦瓶或液氮罐。如果必须在封闭场所使用，需安装氧气监测器并做安全培训。如果报警立即撤离该区。房间内外均安装报警发声器，以防止其他人员误入。
　　低温液体制冷剂的低潜热和高扩容特点，有爆炸危险。杜瓦瓶必须小心搬动。晃动和掉落液体容器可以引起内部压力急剧增加。低温容器都配备有用来控制内部压力的压力释放装置。常态会定期排出气体，不得堵塞，拆卸、改装降压装置。
　　个人防护装备包括ANSI（美国国家标准学会）标准的耐冲击面罩，厚手套和实验室大衣。

胡杨

胡杨 发表于 2014-6-10 16:29
　　处理干冰必须戴绝缘手套和防护眼镜。使用夹子取干冰块，用勺子舀颗粒状干冰。处理干冰让其在通风良好 ...

　　用于冷冻细胞和病毒的冷冻管和玻璃安瓿瓶，从低温储存罐中取出时可能会瞬间爆炸。其发生多因冷冻管有微小裂纹，液氮进入所致。解冻时液氮迅速膨胀的气体使管子爆炸，喷溅冷冻标本。因此，尽可能在气态下冷冻标本，而不是浸没在低温杜瓦瓶的液氮中。不完全密封气相冷冻瓶会放出少许液氮维持气态。有时在爆炸之前由于冷冻管中液氮气化会持续发出嘶嘶声可以警示，但没有嘶嘶声并不意味着是安全的。冷冻管和玻璃安瓿从液氮罐取出后，立即垫上纱布或纸巾放置在耐高压厚壁容器中，并迅速关闭厚盖。如果发生爆炸，高压灭菌处理整个容器。
　　切勿在下水管道倾倒低温液体。实验室水管会变脆，在低温下容易破裂。在低温下木材等多孔材料可以富集氧，低温液体膨胀将发生爆炸。
　　传染性标本安瓿在杜瓦瓶内破损能够污染液氮，传染性污染物还会污染杜瓦瓶内其他小瓶标本并随液氮蒸发产生传染性气溶胶。推荐使用额定液氮温度下的塑料冻存管，因为它们比玻璃安瓿坚固，不易破损。
　　　滑倒，绊倒，跌倒会导致实验室工作人员将含有传染性病原体摔落或危险化学品泄漏等事故。也能导致皮肤划痕和擦伤，使实验室人员更容易受到LAIS 。地面潮湿有水或油腻松散是导致滑倒的主要原因。组织包埋石蜡切片工作场地可以使地板光滑，需经常清洗。地板存留积水，矿物油，不锈钢清洁剂，以及其他实验室化学品和/或试剂，要及时用肥皂水清理。实验室内不得穿凉鞋、拖鞋。良好的内部管理是减少滑倒，绊倒，跌倒最根本的手段。如果没有良好的管理，任何其他预防措施（如安装防滑地板，特种防滑鞋，技术培训）将永远不会完全有效。绊倒的常见原因包括视野受阻，采光差，走道堆积杂物，拉明线，打开抽屉或柜子不关，地面不平。不建议铺但有铺的垫子和地毯松散。实验室安全员必须针对性逐一监管排查。
    实验室普遍采用UV灯消毒。长期暴露在直接或反射的紫外线下与皮肤癌，角膜瘢痕和皮肤灼伤有关。生物安全柜不得使用紫外线灯消毒，因为裂缝里、阴影部位和设备下隐匿的微生物体UV处理无效。另外，UV灯产生的辐射和臭氧会加速BSC的塑料和橡胶件老化，缩短其寿命。这种老化还会影响移液器和其它敏感设备的功能。如果各种原因使得必须要在生物安全柜使用UV灯，由于紫外线杀菌灯有预期寿命，必须配备并校准紫外线强度检测仪来监控生物安全柜内紫外线辐射水平。
    紫外线照射消毒不要超过15分钟，因为增加照射时间它不会产生任何额外的杀菌效果，反而加速设备的老化，作用适得其反。紫外线灯绝不能与人员同时工作。不是所有的防护眼镜都能够保护实验室工作人员的紫外线照射伤害。紫外线灯具维护，或存在可能的直接或间接（反射光）照射时，应佩戴防紫外线安全眼镜。用紫外视图框工作缺乏保护罩时，应穿长袖实验室工作服，戴上手套以及脸全遮面罩。在使用紫外线灯的区域，必须悬挂警示牌“小心紫外线，戴防护眼镜”。【待续】

胡杨

    普通实验室通常会使用负压吸引过滤及侧臂烧瓶真空装置。电镜室使用真空辅助蒸发器，实验室酶联免疫分析等使用负压抽吸系统。真空负压辅助装置压差超限有内爆危险和产生气溶胶的风险。必须使用压力调节器和小心碰撞。当处理传染性病原体或血液标本，强烈推荐使用塑料标本瓶。真空抽吸安装U型弯管防止真空泵或室内真空系统污染。抽吸系统会造成液面低压产生气溶胶。因此操作必须在BSC内进行。配戴上一次性实验室工作服和手套，以保护自己免受飞沫传染。操作完毕，BSC风机再常规运行5分钟，以清除空气悬浮微粒，净化柜表面。BSC的高效空气过滤器（HEPA）潮湿或明显受阻，或每6个月必须更换。
　　　切勿将未消毒处理的感染性液体废物倒入水池中。在BSC内消毒真空泵抽吸U型弯管。吸入10-50毫升的新鲜配置有效氯溶液，提起软管完全浸润等待20分钟，然后从BSC取出U型弯管冲洗。负压吸引瓶使用不超过四分之三满，以防止满溢。某些实验室采用预计吸出液体日最大量和需要添加有效氯溶液的量做最大容量标记做消毒和预防溢出。废液消毒后可倒下水道外排。
　　　穿刺和切割：临床实验室必须建立锐器伤害预防措施。皮肤破损和切口可以提供使传染性病原体直接进入人体的感染途径。避免使用针头和注射器，尽可能寻求可替代操作方法。回帽最常发生针刺伤，必须回帽则使用安全装置。不得使用针头销毁装置，因为其可以造成气溶胶污染。用毕锐器置防刺容器，贴通用生物危害标识，及时无害化处置。冰冻切片刀片/低温设备叶片也属于利器的一类，刀片拆装、清洁消毒均必须戴防割手套小心处理。
　　　不要戴手套或徒手捡拾碎玻璃，必须使用镊子、一次性塑料勺子、钳子或止血钳。碎玻璃及时放入锐器盒。无污染碎玻璃器皿可使用扫帚、手刷和簸箕。不使用豁口或有裂纹玻璃器皿，发现立即敲碎丢入锐器盒。当处理感染性物质发生容器破裂，必须及时评估，安全前提下戴合适手套用布或纸巾盖上破损容器和洒出的感染性物质。在BSL-2实验室，取1：10备用漂白水倾倒覆盖污染区域并保留20分钟以上，空气污染的清除根据ACH评估。使用钳子连同纸布覆盖物一起置利器盒。也可使用小型HEPA真空吸尘器去除残留细小玻璃颗粒。实验室纸质文档污染，做医疗废物处置，重新复制、打印或印刷文档。
　　　安全使用巴斯德吸液管。使用前检查有无破损，否则做锐器处置。尽可能使用塑料制品替代。刀剪和匀浆机常做组织标本处理使用，必须避免皮肤划伤。尖镊子取细小物品可以刺伤手指，载玻片，培养管等破碎很容易穿透乳胶手套和皮肤。切割玻璃安瓿使用专用安全切割器防止割伤手指。含有感染性物质安瓿，覆盖浸有消毒液的纱布再安全切割。安全安瓿切割器使用后置备用1:10漂白剂溶液中浸泡消毒。 【待续】

胡杨

　　　安全使用各种锐器，及时丢弃入锐器盒。装得太满容易被顶开伤害处置人员。二次处置容易导致二次污染和锐器伤。因此避免锐器二次处置。锐器盒1/3-3/4满闭合安全转运。按当地法规安全处置锐器。未被污染锐器，置防刺闭合容器内做生活垃圾处理。切勿将锐器无保护混入生活垃圾中，造成处置人员伤害。
　　　实验室工作避免手接触眼睛,鼻子,嘴唇。不要将笔、安全眼镜或其他实验室物品放到嘴边。实验室内不得放置食物或饮料。吃喝、吸烟、装戴隐形眼镜、化妆一律禁止。禁止嘴移液，必须使用机械移液装备。接触潜在危险物后和离开实验室之前必须洗手。接触有害物质必须戴手套。在分子生物学实验室,手套也保护标本，防止源于皮肤的核酸酶污染。
　　　手套污染或完整性破坏必须更换。脱去手套洗手，不洗涤或重复使用一次性手套。在实验室里戴手套不得触摸嘴脸,眼睛。实验室戴过的手套被认为是潜在的污染物,做感染性废物处理。当接听电话或者使用电脑等办公设施必须脱去手套。实验室戴手套，可以防止徒手导致的周围污染而便于环境清洁。工作台面必须使用耐热防水抗酸碱有机物材质，每班工作完毕或有任何洒溅污染，必须使用规定方法消毒处理。实验室座椅必须使用可清洗无孔材料，不得使用布类座椅。
　　　电话是病原微生物传播的危险载体，戴手套不得接打电话。尽可能使用免提电话或电话免提功能。使用适宜消毒剂定期消毒电话。酒精不能灭活HIV、甲肝、流感、轮状病毒等非包膜病毒和破坏DNA病毒，因此不要使用。公文包、手包、背包、书籍、杂志和其他个人物品一律不得带入实验室。因为这些东西很难消毒。
　　　所有实验室工作人员有尽可能减少飞溅和气溶胶产生的责任。操作溅到眼睛必须冲洗至少15分钟。如果戴隐形眼镜，必须取出眼镜片冲洗眼睛。一次性隐形眼镜丢弃，复用隐形眼镜消毒后使用。必要时与厂商联系咨询。
　　　标本容器、试管等柱形容器操作时在台面很容易倾倒，必须有物架支撑保障。吸液，混合，搅拌，离心和超声容易产生气溶胶吸入肺部，沾污人体粘膜或污染台面与戴手套的手。规范性操作能够杜绝产生感染性气溶胶。移液管和移液过程是感染性气溶胶和环境污染的常见来源。因此，移液时穿长袖实验室工作服，戴手套，护目镜，并在BSC进行移液操作是慎重的做法。
　　　超声波清洗物品前必须先清洗。超声使用最低有效功率，盖盖。尽可能减少气溶胶的产生。经常更换超声清洗液，以防止洗液中的细菌随产生的气溶胶污染环境。【待续】

胡杨

本帖最后由 胡杨 于 2014-6-10 16:40 编辑

胡杨 发表于 2014-6-10 16:32
　　　安全使用各种锐器，及时丢弃入锐器盒。装得太满容易被顶开伤害处置人员。二次处置容易导致二次污染和 ...

　　　微生物实验室的所有工作区域都被认为是污染的。和诊断实验室其他区域一样，对其进行清洁区和污染区的划分和管理。
　　　清洁区：在污染区和清洁区穿不同颜色的工作服。或者规定进入清洁区脱去不穿工作服。污染区的钟表、电话、计算机、纸巾盒、工作本等复用物品设施消毒后带入清洁区，并立即做“实验室专用”彩色标识粘贴。限于清洁区使用的笔记本、工作笔等小物品可采用醒目外观视觉特征提醒。清洁区和污染区必须标识清楚，地面需要清洁，标识不得粘贴地面。建立清洁区管理制度。培训区域识别与维护能力并记录培训效果。
　　　办公区：在实验室内与实验室工作区域混合的办公区，一般很容易消毒而不需要特殊处理，常备并使用手消剂即可。但有些细节容易被人忽略，要保持警惕。比如实验室里的记录本、报告单，笔等小物件，或已被戴手套的手接触过；很难消毒的地毯椅子；不得带入实验室的衣服手包食物以及食物等等。所以，虽说“办公区”界定为是干净的区域，但并不意味着不会被污染。尤其是实验室内的物品能够自由地在两区域交替出现的时候，会增加污染风险。因此，需要明确：
　　　1、不得将标本、培养物等类似物品拿到办公区；
　　　2、进入办公区必须去除PPE，并洗手；
　　　3、清洁区设置私人物品专用柜；
　　　4、定期消毒办公区电话、键盘、办公桌。
　　　5、办公区避免触摸眼睛，鼻子，嘴巴，嘴唇。
　　　6、不要将钢笔，铅笔，眼镜、蝴蝶领结等其他物品接触口或嘴唇。
　　　7、办公区不得存放食物和化妆。
　　　8、从办公室进入休息室，行政区域，食堂和图书馆等公共区域前要洗手。
　　　9、纸箱、杂物难以清洗消毒。办公区尽可能整洁。
　　　10、实验室负责人有责任评估进入办公区的实验室纸质文档和污染区物品带来的暴露风险，并推出相关制度降低风险。
    污染区：实验室的所有工作领域，包括内部所有设备，键盘，垃圾和区域表面，均为污染区。实验室污染区的处置操作规程目前并没有统一标准。实验室人员必须明白，接触污染区物品可能导致病原体传播的风险给予高度关注。
    仪器设备：无论自动还是手动设备，处理样本均能够产生气溶胶和飞沫，必须建立SOP和做好个人防护，防止暴露于传染性病原体。
    水浴锅和水加湿CO培养箱容易滋生微生物，水中定期加入消毒剂。泄露立即清洗。每周一次水温90℃以上30分钟加热去污。经常清空与清洗可以减少生物积累和产生难以去除的生物膜。
    离心机是高危设备。实验室必须加强培训，建立操作手册，定期维护保养。购买具有自锁、平衡、限速等安全功能的离心机。转子每年抗压检测，使用登记。如果发生标本管离心破碎需切断电源，静置气溶胶沉结后开盖取出容器置BSC内。通知同事或主管，罐内倒入1:10稀释漂白液浸泡20分钟。钳镊取出破碎物置锐器盒，彻底清洁消毒离心罐。如果罐损坏污染离心机，处理方法咨询产商。
    全自动分析仪的安全功能，可以降低风险，但并不能完全消除暴露可能。必须按照制造商的使用手册操作。仪器运行时确保安全罩和防护装置良好。擦拭取样探头必须戴手套垫防渗塑料涂层纱布。小心处理样品盘卡板，不采样时盖盖防止溢出。废水处置必须符合国家和地方法规。标本泄漏或污染仪器，按制造商使用手册说明清洗和故障排除。
    ELISA洗板机能够通过搅拌液体产生气溶胶。处理酶标板必须戴手套。ELISA洗板机与工作区域每日消毒。细菌鉴定和药敏仪，血液培养仪， PCR等其它实验室仪器设备必须根据制造商的使用说明书进行清洁与消毒。每个仪器的正常和紧急清洗程序必须做为SOP的安全部分内容纳入。
    快速检测试剂盒无论是在实验室还是在医疗点使用，均被认为是污染操作。在限定区域操作使用，防止微生物或气溶胶污染。建议使用一次性防滑吸水聚乙烯薄膜衬垫减少泄漏和污染。使用完毕存放前检查检测试剂盒并做外表面消毒。
    临床检验实验室按单流向工作流程布局设计。试剂调配区最清洁，下来是样品制备区，最后是样品检测区。指定区域间可带出物品（如笔，胶带，剪刀，手套盒）
进入各区域前洗手，更换实验室工作服和手套。如果在BSC外发生感染性气溶胶释放应启动应急响应程序。
1、所有人员必须立即撤离实验室。
2、所有可能接触者做暴露的医学评价。
3、向实验室主管通报暴露情况。
4、实验室至少30分钟空置。如果实验室没有空气处理系统,进入时间还要往后推迟，比如24小时以上。
5、空置期间该区域张贴悬挂“禁止入内”警示标识。
6、空置后在生物安全监督员的监督下，穿戴适当的个人防护装备进行环境清洁处理。
　　　真菌和病毒实验室生物安全通则需符合微生物实验室要求。结核等特殊病原体实验室围绕病原体特性加强生物安全防范。例如结核病实验室以空气与飞沫传播病原体的生物安全防控为核心。具体详见相关标准与指南。